| 详细描述 |
| 分子量 |
1200 |
| Ex/Em |
684/707 nm |
| 消光系数 |
183,000 cm-1M-1 |
| 反应基团 |
NHS 酯 |
| 反应性 |
蛋白和配体、胺修饰的寡核苷酸上的伯胺 |
| 运输及储存 |
室温或湿冰，-20℃，避光 |
| 介绍 |
AF 680是一种明亮且具有光稳定性的近红外染料，其光谱与 Cy5.5 染料相似。AF 680 染料用于成像和流式细胞分析中稳定信号的生成，具有水溶性和 pH 值不敏感性 (pH 4 - pH 10)。该长波长 AF染料的荧光人眼不可见，但很容易被大多数成像系统检测到。AF 680 的 NHS 酯（或琥珀酰亚胺酯）是将该染料与蛋白或抗体偶联的较常用工具。NHS 酯可用于标记蛋白、胺修饰的寡核苷酸和其他含胺分子的伯胺 (R-NH2)。所得 AF 偶联物将显示出比其他光谱相似荧光基团的偶联物更亮的荧光和更高的光稳定性。 |
| 典型偶联反应 |
您可以将胺反应性试剂与几乎任何蛋白或肽偶联（提供的方案针对 IgG 抗体进行了优化）。您可以针对任何量的蛋白按比例缩放反应，但为了获得最佳结果，蛋白的浓度应至少为 2 mg/mL。我们建议使用三种不同的反应性试剂/蛋白摩尔比进行三种不同程度的标记。
AF NHS 酯通常溶于高质量的无水二甲基甲酰胺 (DMF) 或二甲亚砜 (DMSO) (D12345) 中，并在 0.1–0.2 M 碳酸氢钠缓冲液（pH 值 8.3）中于室温下进行反应，持续 1 小时。由于末端胺的 pKa 低于赖氨酸 ε-氨基基团的 pKa，您可以使用接近中性 pH 值的缓冲液对胺末端进行更具选择性的标记。 |
| 偶联物纯化 |
通常使用凝胶过滤柱（如 Sephadex™ G-25、BioGel™ P-30 或等效柱）将标记抗体与游离 AF 染料分离。对于更大或更小的蛋白，选择具有适当分子量滤除点的凝胶过滤介质或通过透析纯化。 |