一、 蛋白质结构编码了荧光。这些荧光蛋白包括绿色荧光蛋白(GFP)、YFP、RFP和各种衍生物。
1.荧光蛋白始祖——绿色荧光蛋白
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),基于GFP晶体结构,通过定点或随机突变手段以期找到功能更强的GFP突变体。应用范围最广的当属增强型GFP(EGFP))和Emerald(祖母绿),不稳在•定增强型绿色荧光蛋白(dEGFP),增强型黄色荧光蛋白(EYFP),增强型蓝色荧光蛋白(EBFP),增强型蓝绿色(青色)荧光蛋白(ECFP)等各种衍生型GFP,发出的荧光颜色各不相同。
2.红色荧光蛋白
GFP虽然用途广泛,但由于其发射光谱仅局限于440-529 nm,细胞内成像时背景较高,无法对活体生物皮下进行更深的荧光标记。与GFP相比,其激发和发射波长更长,在细胞内成像时背景低,并且红色荧光蛋白能够与GFP共同标记。
早用于研究的红色荧光蛋白是DsRed(发射峰在583nm),来源于珊瑚,荧光强、稳定性好。DsRed易形成寡聚体,且成熟速度慢,DsRed的突变体有mBanana、mOrange、dTomato、mTangerine、mStrawberry和mCherry,其中mStrawberry和mCherry,发射峰分别为596nm和610nm,亮度分别为EGFP的75%和50%左右。
3.常用荧光蛋白的物理属性
二、 衍生自在藻类和植物中发现的藻胆蛋白
这些蛋白质使用藻胆蛋白辅因子来吸收光能,包括藻红蛋白(PE)、别藻蓝蛋白(APC)和紫草素叶绿素(PerCP)。
特点:
具有较大的斯托克斯位移(75-200 nm),并且具有稳定的发射光谱。
由于藻胆蛋白较大,因此它们在结合过程中通常具有1∶1的蛋白质与荧光染料比率,因此对于定量流式细胞术非常有用。易受光致漂白,不建议长时间或反复暴露于激发光源中。
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